raw264.7細(xì)胞培養(yǎng)經(jīng)驗(yàn)分享

　　raw264.7細(xì)胞源自Abelson鼠科白血病病毒誘導(dǎo)的腫瘤。sIg-,Ia-抗原、Thy-1.2表面抗原陰性。此細(xì)胞株不分泌可檢測(cè)到的病毒顆粒，XC斑點(diǎn)形成試驗(yàn)陰性。可以胞飲中性紅并吞噬乳膠顆粒與酵母聚糖。可以抗體依賴性地分解綿羊紅血球與腫瘤靶細(xì)胞。LPS或PPD處理2天可誘導(dǎo)分解紅血球但對(duì)腫瘤靶細(xì)胞無作用。

　　raw264.7細(xì)胞培養(yǎng)經(jīng)驗(yàn)：

　　1.基本情況：小鼠來源白血病毒誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞，屬于巨噬細(xì)胞，貼壁生長(zhǎng)。下圖是ATCC來源。主流觀點(diǎn)是以橢圓圓形細(xì)胞為主，激活分化后才有觸角。

　　形態(tài)以類圓形和不規(guī)則為主，一般1--2個(gè)核，極少數(shù)有3個(gè)核，胞漿伸展時(shí)胞體較大。鏡下細(xì)胞為小珍珠似的圓形橢圓形。

　　2.培養(yǎng)情況

　　培養(yǎng)條件：10%FBS+高糖DMEN，進(jìn)口gibco血清更好

　　傳代：細(xì)胞增殖較快，70%即可傳代，細(xì)胞有觸角也提示需要傳代，1：3----1:6傳代，推薦使用皿。傳代時(shí)切記不要使用胰酶，正常情況下此細(xì)胞貼壁不牢，直接吹打即可，胰酶消化會(huì)使細(xì)胞伸出觸角改變形態(tài)。我是直接用培養(yǎng)基吹打，也可以用PBS，感覺無差異。這個(gè)細(xì)胞增殖較快，培養(yǎng)基消耗快容易變黃，要勤換液。

　　凍存和復(fù)蘇：和普通細(xì)胞無異。

　　raw264.7細(xì)胞作為巨噬細(xì)胞有很強(qiáng)的吞噬能力，吞噬抗原后伸出長(zhǎng)角，就是大家常見的偽足。同時(shí)貼壁黏附能力增強(qiáng)，傳代時(shí)難以消化下來。該細(xì)胞貼壁時(shí)間短，成片生長(zhǎng)，似小菌落般小片生長(zhǎng)，連成一片并會(huì)疊層。傳代密度不易過高或者過低，過低會(huì)導(dǎo)致細(xì)胞生長(zhǎng)緩慢甚至不生長(zhǎng)，過高，細(xì)胞會(huì)長(zhǎng)出偽足。

　　3.關(guān)于RAW264.7分化，正常細(xì)胞為貼壁不牢的圓形橢圓形細(xì)胞，分化后伸出偽足，貼壁能力增強(qiáng)。

　　避免方法：

　　1，血清建議采用進(jìn)口的真血清，

　　2，密度不要太高或者太低，傳代時(shí)切不可拖延時(shí)間，

　　3，傳代時(shí)切不可胰酶消化，直接吹打就能下來，

　　4，不要污染，包括其他細(xì)胞株的污染。