染色凋亡試劑盒貼壁細胞的處理方法

　　染色凋亡試劑盒（Hoechst 33342/PI Apoptotis Assay Kit）是一種采用Hoechst33342和碘化丙啶（Propidium lodide，PI）雙熒光染色方法進行細胞周期與細胞壞死分析的檢測試劑盒。單純的PI染色能夠觀察DNA直方圖上凋亡細胞的亞G1峰，但只能代表G0/G1期發(fā)生凋亡，無法觀察S期和G2期發(fā)生的細胞凋亡。而且，細胞經(jīng)過固定后無法對活細胞和死細胞進行區(qū)分。可以穿透細胞膜，進入正常細胞和凋亡細胞，與DNA結(jié)合，能在紫外線下顯示藍色熒光，而且染色后凋亡細胞熒光會比正常細胞明顯增強。

　　細胞凋亡是生物界重要的生命現(xiàn)象之一。從線蟲至高等的哺乳類動物，從胚胎至成人，從生理到病理，從生到死的整個過程，體內(nèi)不同的細胞多具有這類死亡方式。自100多年前Carl Vogt 發(fā)現(xiàn)這種死亡方式到1972年Kerr等人研究并命名這種死亡為凋亡（apoptosis），其后大量有關(guān)凋亡的研究不斷深入，人們對此也不斷產(chǎn)生新的認識：凋亡是由基因編程調(diào)控的細胞自主過程，也是機體維持自身穩(wěn)定的一種基本生理機制，是有許多基因產(chǎn)物及細胞因子參與的一種有序的細胞自我消亡形式。調(diào)亡過程一般可分為三個階段：誘導(dǎo)期、效應(yīng)期和降解期。

　　染色凋亡試劑盒貼壁細胞處理方法：

　　1、取潔凈蓋玻片在70%乙醇中浸泡5分鐘或更長時間，無菌超凈臺內(nèi)吹干或用無菌的PBS 或生理鹽水洗滌3次，再用細胞培養(yǎng)液洗滌1次。

　　2、加入干預(yù)條件使細胞發(fā)生凋亡后，吸盡培養(yǎng)液，加入Hoechst 固定液0.5ml。

　　3、去除固定液，用PBS或生理鹽水洗，吸盡液體。洗滌時宜用搖床，或手動晃動。

　　4、加入Hoechst 33258染色液0.5ml孵育。也宜用搖床，或手動晃動數(shù)次。

　　5、棄染色液，用PBS或生理鹽水洗，吸盡液體。洗滌時宜用搖床，或手動晃動。

　　6、滴一滴抗熒封片劑于載玻片上，蓋上貼有細胞的蓋玻片，讓細胞接觸封片劑，盡量避免氣泡。

　　7、熒光顯微鏡可檢測到呈藍色的細胞核。激發(fā)波長350nm左右，發(fā)射波長460nm左右。