hela細(xì)胞進(jìn)行傳代培養(yǎng)的操作步驟

　　hela細(xì)胞通過關(guān)閉某些信號通路(包括PI3K和MKK4/MAPK信號通路),激活某些信號通路(包括cAMP、Ca~(2+)—CaM、PKC、Ras和P38/MAPK信號通路),激活或抑制不同的信號分子,使細(xì)胞產(chǎn)生具有針對性的細(xì)胞效應(yīng),包括誘導(dǎo)表達(dá)多種特異性蛋白(酶、細(xì)胞骨架蛋白、細(xì)胞因子等)、改變代謝途徑、減弱某些代謝、加強(qiáng)另一些代謝以及提高胞內(nèi)運(yùn)輸能力等,使自己可以適應(yīng)痢疾桿菌的侵襲而生存下去。
 

　　hela細(xì)胞傳代培養(yǎng)的操作步驟：
 

　　1.觀察培養(yǎng)基是否正常，細(xì)胞狀態(tài)如何，細(xì)胞密度如何，決定是否傳代。觀察時(shí)擰緊蓋子。
 

　　2.加熱PBS、versene、培養(yǎng)基，(提前做好)瓶子不要倒著放，不要讓液體接觸到瓶塞。
 

　　3.打開超凈臺(tái)(先開風(fēng)機(jī)，后開照明)，用75%乙醇清潔臺(tái)面，點(diǎn)燃酒精燈。不要把廢液缸拿出去倒，如果廢液太多，可以用其他容器先裝廢液。取小離心管一個(gè)，置于架子上。
 

　　4.取尖吸管、吸量管各一支，放置在專用的架上。放置的方式，注意吸管、吸量管前端都不要與架子接觸。
 

　　5.取待傳代的細(xì)胞。打開versene，用酒精燈外焰燒。燒吸管時(shí)距離酒精燈心遠(yuǎn)些，不要把渣滓?guī)нM(jìn)去。把試劑拿入臺(tái)子的時(shí)候，盡量平穩(wěn)，不要讓試劑碰到瓶口。
 

　　6.用吸量管吸取舊的培養(yǎng)基，置離心管中，吸量管加入versene，然后將versene瓶收起來。(加versene主要是為了將舊培養(yǎng)基洗去)。在離心管中間部分將液體加入。吸液體和加液體時(shí)都不要對著細(xì)胞。
 

　　7.打開胰酶，然后將versene棄掉。換新管，用尖吸管吸取適量胰酶加入。加胰酶后，盡快放平，使細(xì)胞消化時(shí)間一致。
 

　　8.將細(xì)胞放入37度孵箱。放孵箱2min,收胰酶，打開PBS.之后拿出來鏡下隨時(shí)觀察。使用二次消化法，去除容器中殘余的細(xì)胞。別忘了用舊培養(yǎng)基中和。