小鼠原代細胞的改良培養

　　小鼠原代細胞培養技術日漸成熟，但在同樣實驗條件下不易獲得，而小鼠基因組與人類基因組有更多相似之處，具有更高的研究價值。改進小鼠乳鼠原代心肌細胞的培養方法，得到純度高、活力強、保持心肌細胞原有結構和功能的心肌細胞。

　　方法：將小鼠心肌組織利用酶消方法分離為單個的心肌細胞，實驗步驟中將經典的胰酶、膠原蛋白酶混合酶消法分解開，先用胰酶消化心肌組織，使心肌組織變得松散，再用膠原蛋白酶，作用于細胞間質的膠原纖維，使心肌組織分離為單個的小鼠原代細胞。調整胰酶和IⅡ型膠原蛋白酶的濃度和作用時間，嚴格控制試劑pH值和各步驟的溫度。

　　結果與結論：心肌細胞在接種24h后開始貼壁，48h后可觀察到部分心肌細胞出現自主搏動，72h后彼此形成交聯，96h后可觀察到心肌細胞形成細胞簇，并出現一致性搏動。心肌細胞的存活率和純度均達95%以上。結果證實，實驗采用改良方法成功培養出小鼠原代細胞，并且保留心肌細胞的結構和功能，純度和成活率高，是可行的培養方法。

　　小鼠原代細胞之所以大力培養原因是小鼠基因組與人類基因組有更多相似之處，具有更高的研究價值。國內外學者對通過培養原代乳鼠心肌細胞，從而進一步研究心肌細胞對缺氧、缺血等相關心臟疾病的發病機制進行了大量工作。大鼠心肌細胞原代培養技術日漸成熟，但是小鼠心肌細胞在同樣實驗條件下不易獲得。采用混合酶消化心肌細胞，而是先用胰酶消化，后用膠原蛋白酶消化的實驗方法獲得心肌細胞，此種操作方法可得到純度高、活力強、保持心肌細胞原有結構和功能的心肌細胞。