293細胞*培養(yǎng)基

293細胞是腺病毒載體的包裝細胞。腺病毒是繼逆轉(zhuǎn)錄病毒后用于基因治療研究的熱門載體。直接將腺病毒載體導(dǎo)入人體內(nèi)表達目的基因，治療惡性腫瘤、心血管疾病或一些遺傳疾病已取得可喜進展；利用腺病毒載體在包裝細胞293中表達分泌性蛋白質(zhì)，如蛋白酪氨*激酶1C等亦成為生產(chǎn)重組蛋白的一條途徑。因此完善293細胞的大規(guī)模培養(yǎng)技術(shù)具有越來越重要的市場意義。哺乳細胞的大規(guī)模培養(yǎng)方式有三種：貼壁培養(yǎng)、微載體培養(yǎng)、無血清懸浮培養(yǎng)。這三種方式均可用于293細胞的大規(guī)模培養(yǎng)。

轉(zhuǎn)瓶培養(yǎng)一般用于小量培養(yǎng)到大規(guī)模培養(yǎng)的過渡階段，或作為生物反應(yīng)器接種細胞準備的一條途徑。與傳統(tǒng)靜止單層培養(yǎng)相比，轉(zhuǎn)瓶具有三大優(yōu)點：為細胞提供較大的生長表面；輕微的轉(zhuǎn)動可以防止培養(yǎng)液中形成的某些成分對細胞生長可能產(chǎn)生的影響：細胞大部分時間僅覆蓋一薄層培養(yǎng)液，有利于氣體交換。我們已成功實現(xiàn)293細胞的轉(zhuǎn)瓶培養(yǎng)。由于293細胞對生長環(huán)境的改變較為敏感，細胞容易成團，因此維持穩(wěn)定的溫度、酸堿度和轉(zhuǎn)動速度對細胞正常均勻生長至關(guān)重要。

胚腎細胞系293是一種E1區(qū)缺陷互.補細胞系。用磷酸鈣共轉(zhuǎn)染法很容易使DNA進入細胞。懸浮的293細胞很容易大規(guī)模培養(yǎng)，但不容易長期保持穩(wěn)定，應(yīng)用時最好采用單層培養(yǎng)。

傳達次數(shù)較少的單層培養(yǎng)293細胞是成功獲得重組病毒和病毒斑的關(guān)鍵。293細胞的培養(yǎng)質(zhì)量特別是單層培養(yǎng)的品質(zhì)情況是病毒斑形成的重要因素。也是重組子構(gòu)建成功與否的關(guān)鍵。293細胞在傳代120次以后，其生長狀況不再*是單層的了，偶爾會形成局部的細胞成團聚集，一旦出現(xiàn)這種情況很能形成病毒斑。應(yīng)立即拋棄，重新引入新傳代的細胞。單層培養(yǎng)細胞在5一10%FBSDMEM中能生長很好。一般來講，1：10傳代后，一周可以長滿。嚴禁過度生長，這點很重要。因為會導(dǎo)致細胞密度加大和堆積，影響病毒斑的形成和轉(zhuǎn)染。