293細(xì)胞正確的培養(yǎng)步驟

　　293細(xì)胞被用于腺病毒載體的繁殖。利用病毒進(jìn)化目標(biāo)基因并將其轉(zhuǎn)移到細(xì)胞中是一種有效的方法。然而，由于病毒作為病原體的特性，它們也會帶來風(fēng)險。因此，為了繁殖這種病毒載體，需要一種能夠表達(dá)缺失基因的細(xì)胞系。不僅具有生成人糖基化譜和建立調(diào)控記錄的能力，而且具有多種優(yōu)勢，是一種特別有吸引力的重組蛋白表達(dá)系統(tǒng)。
 

　　293細(xì)胞培養(yǎng)步驟：
 

　　一、復(fù)蘇細(xì)胞：
 

　　將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加入5mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000RPM條件下離心5分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加4-6mL*培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜(或?qū)⒓?xì)胞懸液加入6cm皿中)，培養(yǎng)過夜。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。
 

　　二、細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
 

　　a)對于貼壁細(xì)胞，傳代可參考以下方法：
 

　　1.棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細(xì)胞1-2次。
 

　　2.加1-2ml消化液(0.25%Trypsin-0.53mMEDTA)于培養(yǎng)瓶中，置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2min，然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況，若細(xì)胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加5ml以上含10%血清的*培養(yǎng)基終止消化。
 

　　3.輕輕吹打細(xì)胞，*脫落后吸出，在1000RPM條件下離心8-10分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。
 

　　4.按5-6ml/瓶補(bǔ)加培養(yǎng)液，將細(xì)胞懸液按1：2的比例分到新的含5-6ml培養(yǎng)液的新皿中或者瓶中。
 

　　b)對于懸浮細(xì)胞，傳代可參考以下方法：
 

　　方法一：收集細(xì)胞，1000RPM條件下離心8-10分鐘，棄上清液，補(bǔ)加1-2ml培養(yǎng)液后吹勻，將細(xì)胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或瓶中。
 

　　方法二：可選擇半數(shù)換液方式，棄半數(shù)培養(yǎng)基后，將剩余細(xì)胞懸起，將細(xì)胞懸液按1:2到1:3的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基新皿中或者瓶中。